Introduction

Caractéristiques de la Culture

Comme mentionné, Pseudomonas aeruginosa est omniprésent dans la nature et peuvent être trouvés dans différents environnements humides. Cela a été attribué au fait que la bactérie se caractérise par une grande diversité métabolique lui permettant de vivre et de prospérer dans diverses niches écologiques.,

en ce qui concerne la culture microbienne, ceci est particulièrement important étant donné qu’une variété de milieux de croissance peuvent être utilisés. Bien que la bactérie se développe bien à 37 degrés C, elle peut également survivre à la plage de température comprise entre 4 et 42 degrés C.

pour étudier diverses caractéristiques de Pseudomonas aeruginosa, certains des milieux utilisés comprennent la gélose D’isolement de Pseudomonas, le bouillon LB, le King A et le MOPS ().,

pour cultiver les bactéries dans la gélose D’isolement Pseudomonas, les plaques (plaques propres et stériles) sont d’abord autorisées à se réchauffer à température ambiante. La gélose est ensuite versée dans les plaques et laissée sécher avant l’inoculation. Une fois la gélose séchée, le spécimen doit être inoculé dans les plus brefs délais après sa collecte.

en général, l’inoculation consiste à rayer l’échantillon sur la surface de la gélose (couvrant environ un tiers de la surface)., Ici, les stries doivent être effectuées à l’aide d’une boucle stérile afin d’éviter de contaminer le milieu avec d’autres micro-organismes.

Suivant l’inoculation, la plaque ou les plaques sont incubées pendant un (1) jour à 37 ° C en aérobiose. Après 24, Pseudomonas aeruginosa apparaissent sous forme de colonies bleu-vert. Si d’autres Pseudomonas ou bactéries non fermentantes sont présentes, elles ne sont pas de couleur Bleu-Vert.,

il convient de noter que les pigments (pigments solubles dans l’eau) produits par Pseudomonas aeruginosa peuvent varier en fonction du milieu ou de la souche de bactéries.

certains des pigments les plus courants comprennent; la pyocyanine de couleur bleu-vert, la pyoverdine de couleur jaune-vert et la pyorubine de couleur rouge-brun.

outre les colonies pigmentées, Pseudomonas aeruginosa cultivé en milieu est également caractérisé par une odeur de raisin., Étant un non-fermenteur, la bactérie est également associée à la production d’acide en culture plutôt qu’aux gaz qui sont généralement associés aux bactéries en fermentation.

des études ont montré qu’en présence de nitrate, Pseudomonas aeruginosa peut se développer lentement dans un environnement anaérobie à environ 42 degrés C.

en dehors des milieux mentionnés ci-dessus, Pseudomonas aeruginosa peut également être cultivé en gélose MacConkey (un milieu de culture bactérienne couramment utilisé pour cultiver des bactéries fermentant le lactose)., Bien que la bactérie ne puisse pas utiliser le lactose présent dans ce milieu, elle survit à la peptone.

dans la gélose MacConkey, Pseudomonas aeruginosa forme des colonies plates et lisses d’un diamètre compris entre 2 et 3 mm. Généralement, ces colonies ont des marges régulières et ont une apparence de peau d’alligator lorsqu’elles sont vues d’en haut.

en savoir plus sur la Culture de Cellules.,les colonies d’osa (de couleur bleu verdâtre) sont de taille moyenne et caractérisées par une croissance irrégulière

· dans la gélose nutritive-Pseudomonas aeruginosa sont associées à plusieurs odeurs allant d’une odeur douce à une odeur de terre

tache de Gram

la croissance des bactéries en culture est importante car elle permet aux chercheurs d’analyser et D’étudier diverses caractéristiques (odeur, texture et forme des colonies, couleur de la colonie, etc.) de l’organisme.,

L’utilisation de la technique de coloration Gram permet aux chercheurs non seulement d’identifier les caractéristiques morphologiques des cellules bactériennes, mais aussi de les différencier en fonction de leurs composants de paroi cellulaire.

les Exigences pour une coloration de Gram suivants:

Exemple de Pseudomonas aeruginosa en culture peuvent être utilisés.,

• lames de Verre
• coloration de Gram réactifs
• Fil de la boucle
• l’Eau
• Brûleur

Procédure

· Si l’échantillon est obtenu à partir d’une plaque de culture, ensuite, il est nécessaire d’ajouter une goutte d’eau sur la lame de verre avant de façon aseptique à l’ajout d’une faible quantité de bactéries.,

· inonder la diapositive de Safranin (contre-coloration) puis rincer à l’eau

· ajouter une goutte d’huile d’immersion sur la lame et observer au microscope

* il est toujours recommandé de préparer plusieurs lames (environ 3 lames)

voir plus sur la coloration des cellules.,

Observation

Lorsqu’il est vu sous le microscope, Pseudomonas aeruginosa apparaît comme rougeâtre/rose tiges. Cela indique qu’il s’agit de bactéries à Gram négatif étant donné qu’elles sont incapables de retenir la tache primaire (violet cristallin).

Sous fort grossissement, des études ont montré que Pseudomonas aeruginosa avait un diamètre de 0,5 à 0,8 um et une longueur de 1,5 à 3,0 um (bactéries en forme de bâtonnet)., Ils sont également caractérisés par un seul flagelle polaire utilisé pour la motilité.

pour certaines souches, des études ont révélé la présence de deux à trois flagelles polaires utilisés pour le mouvement. En plus des flagelles, Pseudomonas aeruginosa possèdent également des pili sur leur surface qui sont utilisés pour l’adhérence et une forme de motilité connue sous le nom de contraction de la motilité.

en savoir plus sur les bactéries Gram-positives et Gram négatif.,

Infection

Comme mentionné, Pseudomonas aeruginosa est responsable de diverses infections contractées à l’hôpital.

selon un rapport publié par le Centre Européen de prévention et de contrôle des maladies en 2012, environ 9% de toutes les infections associées aux soins de santé sont causées par Pseudomonas aeruginosa, ce qui en fait le quatrième agent pathogène le plus courant responsable des infections dans les hôpitaux européens.,

Pour la plupart, la bactérie est un pathogène opportuniste des tissus des muqueuses. Cependant, des infections de la cornée (l’œil) et des voies urinaires ont été rapportées.

selon le patient, les infections des voies respiratoires vont de la pneumonie nosocomiale aux infections pulmonaires chez les patients atteints de fibrose kystique.,

Nosocomial Infections

Essentially, nosocomial infections are hospital-acquired infections and thus occur post-admission.,

Certains de ces infections comprennent:

Graver des infections de plaies – En plus de Staphylococcus aureus et Streptococcus pyrogènes, Pseudomonas aeruginosa est l’une des principales causes d’infections invasives chez les patients brûlés. Ici, le site de blessure (de la brûlure) permet l’invasion successive de la bactérie.,

en plus d’entrer dans le corps par la peau blessée, il a été démontré que la bactérie pénètre à la suite d’une blessure par inhalation, augmentant ainsi le risque d’infections respiratoires.

Bactériémie – Pseudomonas aeruginosa est également l’une des principales causes de bactériémie nosocomiale. Étant donné qu’il a été démontré que cet organisme particulier est résistant à divers antimicrobiens, il a été démontré que ces infections entraînent une mortalité plus élevée que certains des autres agents pathogènes responsables de la bactériémie.,

pneumonie associée à L’hôpital et au ventilateur-étant donné que les voies respiratoires offrent des conditions favorables à la vie, la bactérie peut facilement causer des infections chroniques et aiguës chez les patients atteints de fibrose kystique.

en outre, l’agent pathogène s’est également révélé être l’une des principales causes de pneumonie associée au ventilateur (VAP), en particulier dans le cas d’une durée accrue de ventilation mécanique.,

Infection Urinaire

Pseudomonas aeruginosa a été montré pour être particulièrement efficace à la formation de surface associés à des biofilms. Pour les patients qui utilisent des cathéters, il a été démontré que la bactérie forme un biofilm à la surface de ces cathéters (cathéters à demeure) et provoque finalement une infection à mesure qu’ils prolifèrent.,

Pathogenesis and Virulence Factors of Pseudomonas aeruginosa

Pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa is made possible by several virulence factors that include:

Lipopolysaccharide – Lipopolysaccharide is one of the main components of the outer membrane of Pseudomonas aeruginosa., En plus du lipide a, un domaine hydrophobe, ce composant de la membrane externe est également constitué d’antigène O (polysaccharide distal) qui détermine non seulement le sérotype de l’organisme mais active également le système immunitaire de l’hôte.

finalement, le polysaccharide entraîne une inflammation dérégulée qui a été associée à la morbidité et à la mortalité.

Flagelle – Comme mentionné, Pseudomonas aeruginosa contient un seul flagelle polaire utilisé pour la baignade dans les environnements humides., En plus de la motilité, cette structure a également joué un rôle important dans l’attachement à l’épithélium, l’invasion ainsi que la formation de biofilm.

Pili de Type IV – les pili de type IV situés à la surface de Pseudomonas aeruginosa jouent un rôle important dans l’adhésion à diverses cellules favorisant ainsi les infections. En plus de l’adhérence, il a également été démontré que les pili sont impliqués dans la motilité des contractions, ce qui favorise la formation de biofilms.,div>· Proteases – Pseudomonas aeruginosa produces a number of proteases including LasB and alkaline protease that destroy tissue

· Alginate – is one of the main components of mucoid exopolysaccharide capsule and plays an important role in cell adherence

Antibiotic Resistance

Following an infection, Pseudomonas aeruginosa has been shown to be resistant to a variety of antimicrobials.,

Il y a plusieurs modes de résistance incluent:

Intrinsèques de résistance aux antibiotiques – Essentiellement intrinsèque de la résistance aux antibiotiques se réfère à la capacité innée de bactéries à échapper aux effets des antibiotiques. Ceci peut être réalisé grâce à diverses caractéristiques structurelles et fonctionnelles.,

Certains des mécanismes par lesquels le Pseudomonas aeruginosa est capable de diminuer l’efficacité de divers antibiotiques (intrinsèquement) comprennent:

Perméabilité de la membrane externe Chez Pseudomonas aeruginosa, la membrane externe est asymétrique bicouche constitué de phospholipides et le LPS (Lipopolysaccharides). Il se compose également de porines qui sont responsables des canaux protéiques bêta-barils.,

La composition de cette membrane rend très restrictive et est responsable pour limiter la pénétration des antibiotiques. Cependant, la membrane n’empêche pas complètement cette pénétration. Au contraire, l’absorption lente de ces molécules contribue à la résistance intrinsèque.

systèmes D’Efflux – outre la membrane externe limitante, Pseudomonas aeruginosa est également capable de pomper des composés toxiques., En particulier, des études ont montré que les protéines associées à la famille résistance-nodulation-division (RND) étaient largement impliquées dans cette activité chez cette bactérie.

ici, les protéines constituent des transporteurs membranaires cytoplasmiques et des protéines de canal de porine membranaire externe impliquées dans l’expulsion des composés toxiques hors de la cellule. Dans les cas où ces pompes sont surexprimées, la bactérie développe progressivement une résistance à une variété de médicaments.,

antibiotiques-enzymes inactivantes – l’un des autres facteurs qui contribuent à la résistance aux antibiotiques est la capacité de la bactérie à produire des enzymes capables de décomposer et de modifier les antibiotiques.

en particulier, il a été démontré que Pseudomonas aeruginosa produit des enzymes telles que l’enzyme hydrolytique β-lactamase qui rompt la liaison amide de certains antibiotiques. Ce faisant, le médicament est rendu inefficace contre l’agent pathogène.

Aussi: Comment les antibiotiques tuent les bactéries?,

résistance aux antibiotiques acquise

la résistance aux antibiotiques acquise est le deuxième mécanisme par lequel Pseudomonas aeruginosa a développé une résistance aux antibiotiques.

ceci est réalisé grâce à:

changement mutationnel – le changement mutationnel est particulièrement bénéfique pour l’agent pathogène comme la modification des cibles antibiotiques leur permet d’échapper aux actions prévues du médicament., Cela peut impliquer la surexpression des pompes d’efflux et donc la capacité de la bactérie à éliminer les substances toxiques de la cellule.

gènes de résistance acquis – il a été démontré que les bactéries sont capables d’acquérir des gènes par transfert horizontal. Dans le cas de diverses souches de P. aeruginosa, l’acquisition de gènes de résistance permet à la bactérie de développer une résistance à divers antibiotiques. Ce transfert peut se produire par conjugaison, transduction ou transformation.,

Adaptative de Résistance à un Antibiotique

Le dernier mécanisme de résistance aux antibiotiques est à travers adaptative de la résistance aux antibiotiques. Généralement, ceci est réalisé par la formation d’un biofilm. Un biofilm fait référence à l’adhésion ou au regroupement de micro-organismes sur une surface donnée.

chez l’hôte, le biofilm formé par Pseudomonas aeruginosa est alors recouvert par une matrice., Par rapport aux autres cellules pathogènes, ces cellules ont tendance à être moins sensibles aux agents antimicrobiens.

Tests de Sensibilité aux Antimicrobiens

Comme mentionné, Pseudomonas aeruginosa a été montré pour être résistant à un certain nombre d’antibiotiques. Cela est dû à un certain nombre de facteurs de virulence associés à l’organisme. Pour cette raison, le test de sensibilité aux antimicrobiens est un test important pour déterminer le traitement le plus efficace pour traiter les infections causées par la bactérie.,

essentiellement, les tests de sensibilité aux antimicrobiens consistent à mettre un micro-organisme en contact avec des antibiotiques afin d’étudier si l’organisme se développera ou non en présence des antibiotiques utilisés.

ici, la gélose Mueller-Hinton utilisant la diffusion de disque peut être utilisée pour le test étant donné que la technique est applicable à un large éventail de bactéries non fastidieuses avec peu de changement d’erreur.,/div>· le mélange est ensuite chauffé pendant environ 1 minute avec agitation fréquente afin de s’assurer que le contenu se mélange correctement

· la gélose est autoclavée pendant 15 minutes à 121 degrés C puis laissée refroidir à 45 degrés C

· la gélose est ensuite versée dans des boîtes de pétri à une profondeur d’environ 4 mm

· les plaques sont autorisées à solidifier à température ambiante et étudier pour s’assurer que le pH reste 7.,3 + 11 à 25 degrés C

* une fois que le chercheur est prêt à tester la sensibilité/susceptibilité de l’agent pathogène, la bactérie est inoculée et les disques antimicrobiens placés sur la culture (à l’aide d’une pince stérile). Les plaques sont ensuite inversées et incubées à 37 degrés C pendant 16 à 18 heures.

* Antibiotique disques contiennent le médicament testé.,me of the antibiotics used to test sensitivity/susceptibility of Pseudomonas aeruginosa include:

• Ticarcillin
• Aztreonam
• Ciprofloxacin
• Kanamycin
• Cefepime

Water Treatment

While Pseudomonas aeruginosa is ubiquitous in nature, it’s commonly found in moist environments., Pour cette raison, on le trouve également dans divers plans d’eau, y compris les lacs et les rivières, etc. Afin de prévenir d’éventuelles infections, un traitement de l’eau est nécessaire.

les tests de sensibilité aux antimicrobiens sont utilisés pour déterminer le désinfectant d’eau le plus efficace. Ici, ce test tient compte de l’impact que les désinfectants testés peuvent avoir sur la santé de ceux qui utilisent l’eau.,

D’après des études antérieures, il a été démontré que Pseudomonas aeruginosa était sensible à plusieurs désinfectants, dont l’ozone, l’iode, les chloramines et le chlore. Pour cette raison, ils sont couramment utilisés pour traiter l’eau dans de nombreux pays développés et en développement.

bien que la désinfection par UV (ultraviolet) se soit avérée efficace pour un certain nombre d’autres microorganismes dans l’eau, cette forme de traitement s’est avérée moins efficace pour Pseudomonas aeruginosa., En conséquence, les options de traitement de l’eau sont souvent recommandés.,s syringae

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