transdução por bacteriofagesedit
a embalagem de ADN bacteriofágico em capsídeos fagosos tem pouca fidelidade. Pequenas partes de ADN bacteriano podem ser embaladas nas partículas bacteriofágicas. Há duas maneiras que isso pode levar à transdução.transdução generalizada ocorre quando pedaços aleatórios de DNA bacteriano são embalados em uma Faga. Acontece quando uma fagina está na fase lítica, no momento em que o DNA viral é empacotado em cabeças fagadas., Se o vírus se replicar usando “embalagens cheias de cabeça”, ele tenta encher a cabeça com material genético. Se o genoma viral resultar em capacidade não utilizada, os mecanismos de embalagem viral podem incorporar o material genético bacteriano no novo virião. Alternativamente, a transdução generalizada pode ocorrer por recombinação. Transdução generalizada é um evento raro e ocorre na ordem de 1 FAG em 11.000.a nova cápsula do vírus que contém parte do ADN bacteriano infecta outra célula bacteriana., Quando o ADN bacteriano embalado no vírus é inserido na célula do receptor, podem acontecer-lhe três coisas:
- o ADN é reciclado para peças sobressalentes.se o ADN foi originalmente um plasmídeo, ele irá re-circularizar dentro da nova célula e tornar-se novamente um plasmídeo.se o novo ADN corresponder a uma região homóloga do cromossoma da célula receptora, irá trocar material de ADN semelhante às acções de recombinação bacteriana.,transdução especializada é o processo pelo qual um conjunto restrito de genes bacterianos é transferido para outra bactéria. Os genes que são transferidos (genes dadores) flanqueiam onde a profecia está localizada no cromossoma. A transdução especializada ocorre quando uma profecia exalta imprecisamente do cromossoma, de modo que os genes bacterianos adjacentes a ele são incluídos no DNA excisado. O DNA excisado é então embalado em uma nova partícula do vírus, que então entrega o DNA a uma nova bactéria., Aqui, os genes dadores podem ser inseridos no cromossoma receptor ou permanecer no citoplasma, dependendo da natureza da bacteriofagem.quando o material fagoso parcialmente encapsulado infecta outra célula e se torna uma profecia, O DNA profagico parcialmente codificado é chamado de “heterogêneo”.um exemplo de transdução especializada é o fago λ em Escherichia coli.a transdução Lateral é o processo pelo qual fragmentos muito longos de DNA bacteriano são transferidos para outra bactéria., Até agora, esta forma de transdução só foi descrita em Staphylococcus aureus, mas pode transferir mais genes e em frequências mais altas do que a transdução generalizada e especializada. Na transdução lateral, A profecia inicia sua replicação antes da excisão em um processo que leva à replicação do DNA bacteriano adjacente. Quando o DNA replicado excisa do cromossomo, genes bacterianos localizados até vários quilobases da praga podem ser embalados em novas partículas virais que são transferidas para novas estirpes bacterianas., Se o material genético Transferido fornecer ADN suficiente para recombinação homóloga, o material genético será inserido no cromossoma receptor.
transdução de células de mamíferos com vectorsEdit viral
as células nervosas do rato expressam proteínas fluorescentes vermelhas e verdes após transdução viral com dois vírus artificiais associados ao adeno.a transdução com Vectores virais pode ser utilizada para inserir ou modificar genes em células de mamíferos., É frequentemente usado como uma ferramenta na pesquisa básica e é ativamente pesquisado como um meio potencial para a terapia genética.
ProcessEdit
nestes casos, um plasmídeo é construído no qual os genes a serem transferidos são flanqueados por sequências virais que são usadas por proteínas virais para reconhecer e embalar o genoma viral em partículas virais. Este plasmídeo é inserido (geralmente por transfecção) numa célula produtora juntamente com outros plasmídeos (construções de ADN) que transportam os genes virais necessários para a formação de viriões infecciosos., Nestas células produtoras, as proteínas virais expressas por estas construções de embalagem ligam-se às sequências de ADN/ARN (dependendo do tipo de vector viral) a transferir e a inserir em partículas virais. Por razões de segurança, nenhum dos plasmídeos utilizados contém todas as sequências necessárias para a formação do vírus, de modo que a transfecção simultânea de múltiplos plasmídeos é necessária para obter viriões infecciosos., Além disso, apenas o plasmídeo que transporta as sequências a transferir contém sinais que permitem que os materiais genéticos sejam embalados em viriões, de modo que nenhum dos genes que codificam proteínas virais é embalado. Os vírus colhidos destas células são então aplicados às células a serem alteradas. Os estágios iniciais dessas infecções imitam a infecção com vírus naturais e levam à expressão dos genes transferidos e (no caso dos vetores de lentivírus/retrovírus) inserção do DNA a ser transferido para o genoma celular., No entanto, uma vez que o material genético Transferido não codifica nenhum dos genes virais, estas infecções não geram novos vírus (os vírus são “replicação-deficiente”).
alguns potenciadores têm sido utilizados para melhorar a eficiência da transdução, tais como polibreno, sulfato de protamina, retronectina e Deae dextrano.
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