Un studiu comparativ privind diferitele metode de colorare și numărul de specimene pentru detectarea bacililor rapizi acizi

Vol. 95 (6): 855-858, Nov./ Decembrie., 2000

Mustafa Ulukanligil+, Gonul Aslan, Sami Tasçi

Departamentul de Microbiologie, Harran University Medical School, Sanliurfa, Turcia

prezența de acid repede bacili în mai multe exemplare a fost investigat comparativ cu Ziehl-Neelsen (ZN) și microscopie de fluorescenta (FM) colorarea în scopul de a determina sensibilitatea în detectarea tuberculozei (TB). Un total de 465 de exemplare obținute de la 295 de pacienți au fost analizate la Harran University Medical School Hospital între martie 1998 și martie 2000. Cultura a fost utilizată ca metodă de referință. Șaizeci și opt de pacienți (23.,1%) au fost diagnosticați ca având tuberculoză prin cultură. Sensibilitățile de colorare Zn și FM au fost de 67,6% (46/68), respectiv 85,2% (58/68). Două sute și unu de pacienți (68,1%) au prezentat un specimen la laborator. Pozitivitatea TB a fost detectată la 42 (20,9%) dintre acești pacienți în funcție de cultură. Sensibilitățile petelor ZN și FM s-au dovedit a fi de 61% și 83% la acești pacienți. Cu toate acestea, la 18 pacienți (6, 1%) care au prezentat două probe la laborator, TB a fost pozitivă la șase dintre ei (33, 3%), iar sensibilitățile ZN și FM au fost de 66%, respectiv 83%., Când au fost colectate trei sau mai multe exemplare de la pacienți (76 pacienți, 25,8%), pozitivitatea TB a fost determinată la 20 dintre aceștia (26,3%), iar sensibilitățile au fost de 80% și, respectiv, 92% în frotiurile colorate cu Zn și FM. datele noastre indică faptul că în diagnosticul TB, FM are o sensibilitate mai mare decât ZN. În special, în cazul unui singur specimen, valoarea diagnostică a FM este destul de semnificativă. Prin urmare, este posibil să se concluzioneze că atât colorarea ZN cât și FM pot fi utilizate pentru diagnosticarea tuberculozei atunci când există mai mult de două exemplare., Cu toate acestea, dacă sunt disponibile doar unul sau două exemplare, este preferabilă colorarea FM.

cuvinte Cheie: Mycobacterium tuberculosis – sensibilitate – Ziehl Neelsen – microscopie de fluorescenta

Tuberculoza (TB) rămâne o problemă majoră de sănătate, cu o estimare de 8 milioane de cazuri noi și 3 milioane de decese din cauza acestei boli în fiecare an, în întreaga lume (Dixie et al.1993). Trei sute până la patru sute de noi cazuri sunt raportate în fiecare an, în Sanliurfa, Turcia dintr-o populație de 400.000 (S. urfa tuberculoza dispensar statistici raport, 1998)., Mai mulți factori sunt responsabili pentru izbucnirea tuberculozei în regiune: deteriorarea condițiilor socio-economice, cu venituri mici și educație inadecvată și o mare ignoranță a bolii, după cum arată faptul că pacienții încetează adesea să ia medicamente atunci când simptomele lor au dispărut. Deși virusul imunodeficienței umane este factorul major în focarele de tuberculoză în locuri precum Statele Unite și Africa, este destul de rar în sudul Turciei. cele mai multe manuale standard de laborator (Janda 1997, Sommers et al., 1988) și liniile directoare pentru mycobacteriology laboratoare (Kent & Kubica 1985) sugerează că cel puțin trei exemplare, de preferință colectate în trei zile consecutive, ar trebui să fie prezentate la laborator pentru acid-fast bacili (AFB) frotiu și cultură de către pacienții suspectați de a avea tuberculoza. Detectarea AFB în frotiuri directe preparate cu sputa concentrată, urină și specimene de alte fluide corporale are o valoare clinică și epidemiologică considerabilă și rămâne cel mai utilizat test de diagnostic rapid pentru tuberculoză în majoritatea țărilor în curs de dezvoltare (Nelson et al. 1998)., În timp ce noi radiometrice și de diagnostic molecular tehnici au fost elaborate și sunt utilizate pe scară largă în țările dezvoltate (Heifets 1997), se estimează că între 60% și 70% din toate cazurile de TB sunt diagnosticate prin intermediul sputei-frotiu de examinare (Guthie et al. 1993). Două metode tradiționale de colorare, și anume microscopia fluorescentă (FM) și metoda Ziehl-Neelsen (ZN) sunt ușor disponibile (Nagpaul 1967). Metoda ZN a fost folosită în mod obișnuit în întreaga lume, în special în țările în curs de dezvoltare, datorită simplității și costului redus (Guthie et al. 1993)., Mai multe rapoarte (Lempert 1944, Boyd & Marr 1975, Janda 1997) au indicat faptul că FM are o sensibilitate mai mare și economisește timp atunci când în comparație cu ZN metodă. Un dezavantaj al tehnicii FM este că uneori poate da rezultate fals pozitive. Cu toate acestea, cele mai multe dintre acestea pot fi prevenite prin restabilirea frotiului conform metodei ZN pentru microscopia cu lumină strălucitoare (Holst et al. 1959, Heifets 1997)., în studiul de față, aceste două tehnici au fost comparate din punct de vedere al sensibilității în diagnosticul TB și a fost examinată corelația dintre sensibilitate și numărul de specimene colectate. În plus, în lumina rezultatelor noastre și a literaturii disponibile, am încercat să identificăm acele tehnici potrivite circumstanțelor noastre.,

MATERIALE ȘI METODE

REZULTATE

DISCUȚII

MATERIALE ȘI METODE

Două sute nouăzeci și cinci de pacient suspectat de a avea TB au fost menționate la clinica noastra (Clinic Laborator de Microbiologie, Harran University Medical School Spital) și un total de 460 de exemplare au fost colectate în perioada Martie 1998 și Martie 2000., Aceste specimene au constat din 430 spută, 17 urină, 4 lavaj gastric și 3 probe de abces cervical, 3 fluide pleurale, 1 fluid peritoneal, 1 specimen de biopsie a ganglionilor limfatici cervicali și 1 specimen de material seminal. toate probele de spută au fost decontaminate și concentrate folosind procedura N Acetil-L-cisteină-hidroxid de sodiu recomandată de Centrul de Control și prevenire a bolilor (Kent & Kubica 1985)., Spută, urină și alte exemplare au fost pregătite folosind convenționale metodă de centrifugare și frotiuri au fost colorate cu carbolfuchsin (ZN) și Auramin-O (fluorocromului) pete (Ebersole 1995). Spută, urină și alte specimen sedimente au fost inoculate pe Lowenstein-Jensen mass-media și incubate la 37oC în 5% CO2 de până la șase săptămâni (Lambi 1995). Cultura a fost utilizată ca metodă de referință și comparată cu tehnicile Zn și FM., La înregistrarea numerelor AFB determinate în frotiurile colorate sub microscopie de imersie (mărire x1000), s-a utilizat următoarea scală de raportare: mai mult de 9 AFB pe câmp (4+), 1-9 AFB pe câmp (3+), 1-9 AFB pe 10 câmpuri (2+), 1-9 AFB pe 100 de câmpuri (1+). Când au fost detectate doar câteva AFB în 300 de câmpuri, rezultatele au fost considerate discutabile. Pentru a echivala numărul de bacili observați cu FM (mărire 400x) cu numărul de bacili observați cu microscopie prin imersie (mărire 1000x), valorile au fost împărțite la 4 (American Thoracic Society 1981).,

REZULTATE

Două sute și unu de pacienți (68.1%) a prezentat un specimen pentru AFB examinare și în 42 (20.9%), organismul a fost izolat din sputa (40 de cazuri), abces material (1 caz) și ganglionilor limfatici biopsie material (1 caz). La acești 42 de pacienți, 28 de probe de spută au dat rezultate pozitive cu colorarea ZN și 38 (37 spută, 1 abces cervical) au dat rezultate pozitive cu colorarea FM. Sensibilitățile colorației Zn și FM au fost de 61%, respectiv 83% (p<0, 05) (tabelul II).,

am observat că frotiurile care au fost pozitive atât cu ZN, cât și cu FM conțineau între 1 și 9 AFB pe câmpuri. Cele 14 frotiuri pozitive, care nu au fost detectate cu frotiuri colorate cu ZN, au fost detectate bacili cu densitate scăzută (1-2 bacili la 100 de câmpuri) pe frotiuri colorate FM. Doar un rezultat fals pozitiv a fost observat cu metoda FM, prin urmare, specificitățile colorării Zn și FM au fost găsite ca 100% și, respectiv, 99%.

optsprezece (6,1%) pacienți au prezentat două probe la laborator și la 33,3% (6 din 18) dintre acești pacienți, organismul a fost recuperat în 1 sau 2 probe de spută., Patru dintre acestea au produs rezultate pozitive cu colorarea ZN (sensibilitate, 66%) și 5 au produs rezultate pozitive cu colorarea FM (sensibilitate, 83%). Doi pacienți pozitivi nu au fost detectați pe baza frotiurilor colorate cu ZN. Frotiurile unui pacient, care au fost colorate cu MF, conțineau 3-5 bacili în fiecare câmp 30-40, în timp ce frotiurile celuilalt pacient au fost negative atât cu FM, cât și cu ZN. Nu a fost detectat niciun rezultat fals pozitiv la acești pacienți.

trei sau mai multe specimene au fost depuse de 25, 8% dintre pacienți (76 din 153) și 20 dintre acești pacienți (26.,3%) au fost diagnosticate ca având TBC prin izolarea organismului într-unul sau mai multe specimene de spută. Șaisprezece dintre ele au produs rezultate pozitive cu colorarea ZN (sensibilitate, 80%), iar 18 au produs rezultate pozitive cu colorarea FM (sensibilitate, 92%). Nu a fost detectat niciun rezultat fals pozitiv la acești pacienți (tabelul II). șaptesprezece probe de urină au fost colectate pentru AFB, dar niciuna dintre acestea nu a fost găsită pozitivă în frotiuri sau culturi colorate., De asemenea, alte specimene (3 lichid pleural, 4 lavaj gastric, 1 lichid peritoneal, 2 specimene de abces cervical și 1 specimen de material seminal) s-au dovedit a fi negative cu colorarea și cultura ZN și FM, cu excepția unei specimene de abces cervical care a dat rezultate pozitive cu colorarea și Cultura FM. Un specimen de ganglioni limfatici cervicali a dat M. tuberculosis numai în cultură.

DISCUȚII

Turcia este o țară în curs de dezvoltare și TB este încă o boală foarte frecventă, în special în partea de sud-est a județului., În Sanliurfa, un oraș din sud-est, condițiile economice sunt încă foarte slabe și 300-400 de pacienți noi cu tuberculoză sunt înregistrați în fiecare an. în ultimii ani, au fost dezvoltate mai multe tehnici radiometrice și moleculare pentru diagnosticarea tuberculozei. Tehnicile radiometrice reduc timpul de rulare pentru AFB. Cu toate acestea, ele nu sunt potrivite pentru această regiune a Turciei din cauza costului ridicat (Heifets 1997). Există puține posibilități chiar și pentru utilizarea tehnicilor moleculare din cauza resurselor noastre financiare limitate. Metodele convenționale, cum ar fi Zn și FM sunt tehnici rapide, simple, cu costuri destul de scăzute., Doar ZN a fost utilizat până acum pentru diagnosticarea tuberculozei în această regiune. Cu toate acestea, are un nivel scăzut de sensibilitate în comparație cu metoda FM. Studiul de față a fost prima noastră încercare de a folosi FM și de a-l compara cu ZN. am efectuat într-un studiu comparativ fiabilitatea metodelor FM și ZN în examinarea frotiurilor pentru AFB. Am constatat că specificitățile FM și ZN au fost de 99% și 100%, iar sensibilitățile cu un eșantion au fost de 83%, respectiv 61%. Când numărul de specimene a crescut, sensibilitatea ambelor tipuri de colorare a crescut., Când am folosit mai mult de două exemplare, sensibilitățile s-au dovedit a fi similare. Prin urmare, este posibil să spunem că, dacă avem mai puțin de trei eșantioane, fiabilitatea FM este mult mai mare decât cea a ZN. Cu excepția cazului în care a fost prezentat mai mult de un eșantion, care nu a fost ușor condițiile socio-economice și culturale existente, FM sa dovedit a fi mai fiabile decât metoda ZN. Mai mult, un alt avantaj al FM a fost că a permis detectarea frotiurilor pozitive, care au fost trecute cu vederea cu frotiuri colorate cu ZN care conțin bacili cu densitate scăzută., Utilizarea FM crește semnificativ valoarea diagnostică a frotiului, în special în cazul în care există bacili cu densitate scăzută care pot scăpa de detectare pe frotiuri colorate cu ZN. Rezultatele noastre au fost în acord cu cele ale Guthie et al. (1993), Ba și Rieder (1999) și Pollack și Wieman (1977), care au raportat că FM pare să fie mai probabil să detecteze TB în frotiuri care conțin bacili cu densitate scăzută.

multe rapoarte (Sommers și colab. 1988, Nelson și colab., 1998) au arătat că micobacteriile pot fi eliberate neregulat din plămâni și că este chiar posibil să se găsească rezultate pozitive și negative la același pacient în aceeași perioadă. Astfel, se recomandă colectarea mai multor specimene de la pacienții suspectați de tuberculoză. Unele alte rapoarte (Ozturkeri et al. 1997, Durupinar și colab. 1997, Pollock & Wieman 1997) au susținut că ar putea apărea reacții fals pozitive cu FM. Am observat un singur rezultat fals pozitiv în studiul de față., Mai mult, nu au apărut reacții fals pozitive în ancheta noastră cu metoda ZN. prioritatea noastră în acest studiu a fost găsirea unei metode rapide și rentabile pentru diagnosticarea tuberculozei în Sanliurfa. Concluzionăm că metoda FM este destul de economică atât din punct de vedere al timpului, cât și al cheltuielilor și este recomandată laboratoarelor care manipulează un număr mare de specimene de spută. Am descoperit că FM este mai fiabil decât ZN. Cu toate acestea, tot personalul care urmează să examineze probele de spută trebuie să se familiarizeze cu FM pentru a preveni rezultatele fals pozitive și/sau negative., Prin urmare, se sugerează că până când nu există personal calificat pentru investigarea AFB, frotiurile ar trebui să fie colorate cu ambele pete și apoi examinate comparativ. După ce personalul laboratorului se familiarizează cu metoda FM, această metodă poate fi utilizată în mod obișnuit pe cont propriu.

  • American Thoracic Society 1981. Standardele de Diagnostic și clasificarea tuberculozei și a altor boli mi-cobacterice. Am Rev Respir Dis 123: 343-358.
  • Ba F, Rieder HL 1999., O comparație a microscopiei fluorescente cu tehnica Ziehl-Neelsen în examinarea sputei pentru bacili rapizi acide. Int J Tuberc Lung Dis 3: 1101-1105.
  • Boyd JR, Marr JJ 1975. Scăderea fiabilității tehnicilor de frotiu rapid acid de detectare a tuberculozei. Ann Intern Med 82: 487.
  • Dixie E, Snider JR, Dooley WS 1993. Tuberculoza nozocomială în era SIDA, cu accent pe boala multi-rezistentă la medicamente. Inimă și plămân 22: 365-369.
  • Durupýnar B, Birinci A, Gunaydýn M, Sanic A 1997., Fiabilitatea tehnicii de colorare auramină-rodamină în diagnosticul tuberculozei. Bull Microbiol 31: 369-374. Ebersole LL 1995. Acid-proceduri rapide de pete în micobacteriologie. În HD Isenberg, Clinic Microbiology Procedures Handbook, Amer Soc Mi-crobiol, Washington DC, secțiunea 3.5.
  • Guthie W, Kitui F, Juma ES, Obvana FACE, Mwai J, Kwamanga D 1993. Un studiu comparativ privind fiabilitatea microscopiei fluorescente și a metodei Ziehl-Neelsen în diagnosticul tuberculozei pulmonare. East Afri Med J 70: 263-266.
  • Heifets L 1997. Laboratorul de micobacterii., Clin Med Piept 18: 35-41 .
  • Holst E, Mitchson DA, Radhakrishna s 1959. Examinarea frotiurilor pentru bacili tuberculari prin microscopie fluorescentă. Ind J Med Res 47: 495.
  • Janda WM 1997. Micobacterii. În EW Koneman, SD Allen( eds), Atlas de culori și Manual de Microbiologie diagnostică, 5 ed., JB Lippincott Co., Philadelphia, p. 893-949.
  • Kent PT, Kubica GP 1985. Mycobacte-riology de sănătate publică: Un ghid pentru laboratorul de nivel III, Departamentul de sănătate și Servicii Umane al SUA, CDC, Atlanta, p. 3-10.
  • Lambi ea 1995., Selecția medie și incubarea pentru izolarea micobacteriilor în micobacteriologie. În HD Isenberg, Clinic Microbiology Procedures Handbook, Amer Soc Microbiol, Washington DC, secțiunea 3.6. Lempert H 1944. Microscopia fluorescentă în detectarea bacili tubercul. Lancet 2: 818.
  • Nagpaul DR 1967. Programul de control al tuberculozei raionale în concept și schiță. Ind J Tubercul 14: 186. Nelson SM, Deike MA, Cartwright CP 1998. Valoarea examinării mai multor specimene de spută în diagnosticul tuberculozei pulmonare. J Clin Microbiol 36: 467-469.,
  • Ozturkeri H, Demir MA, Balli s, Aydilek R 1997. Evaluarea comparativă a diferitelor metode de colorare în diagnosticul tuberculozei. Bull Microbiol 31: 231-236.
  • Pollock HM, Wieman EJ 1977. Smear are ca rezultat diagnosticul de micobacterioză folosind microscopie fluorescentă cu lumină albastră. Clin Microbiol 5: 329-331.
  • Sommers Hm, McClatchy JK, Morello ja 1988. Diagnosticul de laborator al Micobacteriozei, CUMITECH 16, Amer Soc Microbiol Washington DC, p. 3-8.,

Table I | Table II