teoría de TLC

Ejemplo de un experimento típico

consejos prácticos de laboratorio

FAQ: para TLC, ¿deben ser iguales el disolvente de muestra y el disolvente elusivo?
FAQ: ¿Cuál es el propósito de un disolvente de muestra en la preparación de una placa de TLC?
FAQ: ¿Cómo determino mi disolvente de muestra?
FAQ: en TLC, ¿Cuál es el propósito de usar el solvente(s) elusivo (s)?
FAQ: ¿Cómo funciona el solvente(s) elusivo (s)?
FAQ: ¿tengo que usar dos disolventes para mi eluyente?
FAQ: ¿qué solvente(s) elige para su eluyente?,
FAQ: al preparar un TLC, ¿por qué debemos elegir el disolvente menos polar para disolver nuestra muestra?
FAQ: ¿Qué es una»proporción de diclorometano : hexano de 3:1″?
FAQ: mis manchas de TLC son demasiado altas, es decir, demasiado cerca del frente del disolvente (o demasiado bajas, es decir, demasiado cerca de la línea de base). ¿Qué hago ahora?
FAQ: ¿cómo se registra correctamente la información obtenida de un TLC?
FAQ: ¿Cuál es el solvente en desarrollo?

teoría: cromatografía de capa delgada (TLC)

durante la cromatografía, una fase móvil (eluyente) distribuye los compuestos presentes en una mezcla sobre una fase estacionaria (adsorbente).,

La cromatografía de capa delgada (TLC) es un tipo de cromatografía, donde:
– la fase móvil es un solvente o mezcla de solventes (eluyente),
– la fase estacionaria es un adsorbente sólido (por ejemplo, sílice o alúmina) recubierto en un soporte estacionario como vidrio o plástico (placa TLC).

primero, se prepara la placa TLC. El sólido desconocido se aplica como solución disolviéndolo en un disolvente. Una parte de la solución se extrae en una micropipeta, luego se aplica al adsorbente cerca de un extremo de la placa TLC (línea de base) permitiendo que la solución se absorba en el adsorbente., Este proceso se conoce generalmente como»manchar su placa de TLC».

el cromatograma se desarrolla colocando la placa TLC en una cámara TLC (un vaso de precipitados que contiene la fase móvil, es decir, el eluyente). El eluyente viajará por el adsorbente por acción capilar hasta la parte superior de la placa de TLC (conocida como el frente de disolvente), llevando la muestra con ella. Este proceso se conoce generalmente como»ejecutar su placa TLC».

dependiendo de la polaridad relativa de la muestra y el eluyente, la muestra se adsorbe a la fase sólida o es eluida por la fase móvil (eluyente)., Si el eluyente es muy polar en relación con su compuesto, disolverá su muestra y la muestra se moverá con la fase móvil.

En general, el eluyente y su muestra competirán por un espacio (un sitio activo) en el adsorbente (fase estacionaria) recubierto en la placa TLC. El compuesto más polar ganará esta competencia y se adherirá (adsorber) al adsorbente, mientras que el resto de la mezcla se moverá.

cuanto más polar sea el compuesto, más se adherirá al adsorbente y menor será la distancia que viajará desde la línea de base, y menor será su valor de Rf.,

eluyente: solvente o mezcla de solventes (fase móvil) utilizados para desarrollar un cromatograma TLC (placa).

elución: el proceso general de desarrollo de una placa de TLC.

Rf (retention or retardation factor): es una medida de la distancia recorrida por el punto compuesto en relación con la distancia recorrida por el eluyente. Un valor de Rf deseable se encuentra entre 0.3 y 0.7, ya que es probable que otros compuestos presentes en la mezcla sean visibles en la placa TLC cuando el Rf está en este rango.,

identificación de un sólido mediante cromatografía de capa delgada (TLC):

primero se prepara una placa de TLC detectando lo desconocido purificado y una muestra auténtica de cada posible compuesto. Luego se desarrolla la placa TLC. Para el siguiente paso (Co-spotting), se elige una muestra auténtica del compuesto más cercano en valor de Rf al desconocido. El co-manchado TLC de una segunda placa permite la identificación preliminar de su compuesto. Se aplican tres puntos al adsorbente en la línea de base de la placa TLC: el desconocido purificado, una muestra auténtica y una co-mancha de muestra desconocida y auténtica., Si la placa TLC desarrollada muestra solo una fila de manchas, se puede concluir que lo desconocido ha sido purificado, y que lo desconocido es posiblemente el mismo compuesto que la muestra auténtica. Sin embargo, debido a que los valores de Rf son relativos, no absolutos, algunos compuestos pueden tener valores de Rf muy similares. Se necesita una medición del punto de fusión mixto para identificar inequívocamente el Compuesto desconocido.

Evaluación de la pureza de un sólido mediante cromatografía de capa delgada (TLC):

La cromatografía de capa delgada (TLC) es una técnica de separación que requiere muy poca muestra., Se utiliza principalmente para determinar la pureza de un compuesto. Un sólido puro mostrará solo un punto en una placa TLC desarrollada. Además, la identificación tentativa del Compuesto desconocido se puede hacer a través del análisis de TLC.

monitoreo del progreso de una reacción:

el progreso de una reacción puede ser monitoreado por cromatografía de capa delgada. En varias ocasiones durante el experimento, una placa TLC se ve tres veces, luego se desarrolla y se ve bajo luz UV:
– En la posición 1 es una muestra auténtica del compuesto inicial.
– En la posición 2 está la mezcla de reacción.,
– En la posición 3 está la muestra auténtica del producto.

la reacción se ha completado, cuando la placa TLC muestra que no queda más material de partida en la mezcla de reacción.

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experimento típico

Earl N. Meyer quería determinar la pureza del ácido benzoico que había obtenido del reciclaje químico. Decidió comprobar la pureza mediante análisis cromatográfico utilizando una placa de gel de sílice TLC. En la placa de TLC marcó la línea de fondo con un lápiz, indicando la posición de manchado con una garrapata., Earl disolvió aproximadamente 20 mg de ácido benzoico en 1 ml de metanol. Luego sumergió una micropipeta en la solución y tocó ligeramente la placa de TLC en la marca marcada en la línea de fondo.

a continuación, Earl preparó la cámara de desarrollo. Cortó un papel de filtro para forrar un vaso de precipitados de 400 ml. Luego preparó el eluyente: 10 ml de una mezcla de diclorometano y metanol en una proporción de 10 : 1. Añadió el eluyente al vaso de precipitados, girándolo sobre el papel de filtro para mojarlo completamente., Earl colocó la placa TLC en la cámara de desarrollo usando pinzas y observó el eluyente viajar por la placa por acción capilar. Cuando el eluyente estaba cerca de la parte superior de la placa, usó pinzas para retirar la placa de la cámara, teniendo cuidado de marcar inmediatamente el frente del disolvente con un lápiz.

Cuando la placa TLC estaba seca, Earl la vio usando luz ultravioleta de longitud de onda larga. Observó una sola mancha azul sobre un fondo verde claro. Su TLC indicó que la muestra analizada contenía un solo componente y que su ácido benzoico era puro., Usó un lápiz para rodear el punto y una regla para hacer las mediciones necesarias para el cálculo del factor de retención.

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consejos prácticos de laboratorio

primero, prepare una placa de TLC: disuelva una cantidad muy pequeña de su muestra desconocida en un disolvente volátil, luego aplique la solución, es decir, spot el adsorbente en la línea de base.

a continuación, prepare la cámara TLC: corte la porción del papel de filtro que se eleva por encima del borde del vaso de precipitados.

Prepare el eluyente utilizando una mezcla de los disolventes sugeridos. Utilice un total de ~10 ml eluyente en un vaso de precipitados de 250 mL.,

al medir líquidos, lea desde la parte inferior del menisco, es decir, mire la parte más baja de la curva en la superficie del líquido.

agitar el eluyente para mojar el papel de filtro y cubrir el vaso de precipitados con una tapa. Esto saturará la cámara con vapores de eluyentes y evitará la evaporación del eluyente.

desarrollar la placa TLC, es decir, permitir que el eluyente absorba la placa TLC hasta que esté a aproximadamente 1 cm de la parte superior de la placa. Inmediatamente después de retirar la placa TLC del vaso de precipitados, dibuje cuidadosamente una línea a lo largo del frente del disolvente., Sea rápido, porque el eluyente se evaporará en menos de un minuto.

visualice la placa desarrollada usando una lámpara ultravioleta u otro método de visualización:
– si se observa que el punto está demasiado cerca de la línea de base, su eluyente no es lo suficientemente polar.
– Si se observa que el punto está demasiado cerca del frente del disolvente, su eluyente es demasiado polar en relación con su compuesto.

el mejor Rf (factor de retención o retardo) se encuentra entre 0.3 y 0.7.

si desea que el Rf de su punto TLC sea más pequeño, i. e.,, el punto para estar más abajo en la placa, debe disminuir la polaridad eluyente. Elija un eluyente diferente (solvente) o ajuste la relación de solvente aumentando el porcentaje del solvente no polar en relación con el solvente polar en el eluyente. Lo contrario es cierto para el Rf de un punto que desea ser más grande, es decir, el punto para estar más arriba en la placa.

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P: para los TLC, ¿el disolvente de muestra y el disolvente eluyente deben ser los mismos?

No. A veces, el disolvente de muestra y el disolvente(s) elusivo (s) son los mismos, pero esto no es necesario., Si se está preguntando por qué pensar en las diferentes funciones que cada solvente juega en el proceso TLC.

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P: ¿Cuál es el propósito de un disolvente de muestra en la preparación de una placa de TLC?

antes de que pueda desarrollar su placa TLC, debe transferir alguna muestra sobre ella. El método más simple para hacer esto requiere que disuelva la muestra en un disolvente. Manchar la placa de TLC usando un micropipete y esperar a que el disolvente se evapore dejará la muestra en la placa de TLC.

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P: ¿Cómo determino mi disolvente de muestra?,

como regla general, el disolvente de la muestra debe: 1) disolver la muestra cuando esté fría, 2) tener un punto de ebullición bajo (por lo que se evaporará rápidamente) y 3) ser lo más no polar posible (por ejemplo, diclorometano), porque si un disolvente de muestra debe permanecer en una placa de TLC en desarrollo, no cambiará en gran medida la polaridad del eluyente(s) que usará.

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P: en TLC, ¿Cuál es el propósito de usar el solvente(s) elusivo (s)?

los Eluentes son la fase móvil en la cromatografía, es decir, el disolvente en el tanque de desarrollo.,

durante el desarrollo del cromatograma, el eluyente distribuye la muestra que transfirió a la placa TLC sobre el adsorbente en la placa.

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P: ¿Cómo funcionan los solventes eluyentes?

la muestra compuesta que vio en la fase estacionaria en la placa TLC tiene dos opciones: adsorberla a la fase sólida o ser eluida por la fase móvil.

si su eluyente (s) es muy polar en relación con su compuesto, disolverá su muestra y la transportará en la fase móvil.,

En general, los solventes eluyentes(también llamados fase móvil) competirán con su muestra por un espacio en el adsorbente (fase estacionaria) recubierto en la placa TLC. El compuesto más polar ganará esta competencia y se adherirá (ad sorb) al adsorbente, mientras que el resto de la mezcla se moverá con la fase móvil .

un eluyente que es muy polar en relación con la muestra, dará lugar a que el punto compuesto se observe con un Rf más grande, es decir, más cerca del frente del disolvente. Por otro lado, si los eluentes son demasiado no polares, el punto compuesto se observará con un Rf más pequeño, i.,e., más cerca de la línea de base.

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P: ¿Tengo que usar dos disolventes para mi eluyente?

Dos disolventes no siempre son necesarios. A veces un disolvente será apropiado. Sin embargo, dos disolventes le permiten ajustar la polaridad del eluyente fácilmente cuando una placa TLC desarrollada no da un resultado apropiado.

un eluyente adecuado es aquel que da un factor de retardo (Rf, también llamado factor de retención) cercano a 0.5 Al desarrollar la placa TLC.,

Es su Rf demasiado alto o demasiado bajo, entonces puede ajustar fácilmente la polaridad si el eluyente se preparó mezclando dos disolventes miscibles cambiando las proprociones relativas dentro de la mezcla de eluyente (por ejemplo, de 1:1 a 3:1).

si solo se utilizó un disolvente, será necesario cambiar a un disolvente con una polaridad diferente.

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P: ¿Qué disolvente(s) elige para su eluyente?

el solvente(s) elusivo (s) que usted utiliza generalmente se determina experimentalmente.,

un eluyente de dos solventes debe contener un solvente polar y un solvente no polar; pero es importante que estos dos solventes sean miscibles (es decir, se disuelvan) entre sí. Una buena Apuesta es comenzar con una relación de 1:1, y luego ajustar la relación en función de los resultados obtenidos a partir de cromatogramas desarrollados.

Si utiliza un eluyente de un solvente, debe comenzar con un solvente que no sea altamente polar como primera opción.

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P: Al preparar un TLC, ¿por qué debemos elegir el disolvente menos polar para disolver nuestra muestra?,

un solvente que no es muy polar afectará el eluyente(s) en menor grado si el solvente no se evapora completamente después de detectar el TLC.

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P: ¿Qué es una»proporción de diclorometano : hexano de 3:1″?

una relación le dice algo acerca de la relación de los componentes dados en una mezcla. En este caso, se deben mezclar tres unidades (por ejemplo, 3 mL) de diclorometano con una unidad (por ejemplo, 1 mL) de hexano para producir un total de 4 unidades (aquí: 4 mL) de la mezcla.

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P: mis puntos de TLC son demasiado altos, p.ej.,, demasiado cerca del frente del disolvente (o demasiado bajo, es decir, demasiado cerca del valor basal). ¿Qué hago ahora?

Cuando su muestra produce un valor de Rf entre 0.3 y 0.7, no necesita ajustar sus eluentes.

sin embargo, si su punto está demasiado cerca del frente del disolvente o de la línea de base, debe ajustar la polaridad de su sistema eluyente.

Spot está demasiado cerca de la línea de Base:
esto significa que su eluyente es, en relación con su muestra, no lo suficientemente polar., Aumente la polaridad de su eluyente ya sea aumentando la proporción del solvente más polar de su eluente o cambiando a un solvente más polar.

Spot está demasiado cerca del frente del disolvente:
su eluyente es, en relación con su muestra, demasiado polar. Usted tiene que disminuir la polaridad de su eluyente, ya sea aumentando la proporción del solvente menos polar de su sistema de eluyente o cambiando a un solvente menos polar.

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P: ¿Cómo se registra correctamente la información obtenida de un TLC?,

Use un lápiz (no un bolígrafo) para indicar ligeramente el frente del disolvente y para delinear las manchas que se ven al visualizar la placa TLC desarrollada con la lámpara UV o con la mancha de yodo.

una vez que haya delineado su placa TLC, Calcule el valor de Rf para cada componente y dibuje una réplica de la TLC en su cuaderno de laboratorio.

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