théorie de la ccm
exemple D’expérience typique
conseils pratiques de laboratoire
FAQ: pour les ccm, le solvant de l’échantillon et le solvant de l’éluant doivent-ils être identiques?
FAQ: Quel est le but d’un échantillon de solvant dans la préparation d’une plaque TLC?
FAQ: Comment puis-je déterminer mon échantillon de solvant?
FAQ: dans TLC, Quel est le but de l’utilisation du solvant(s) éluant (s)?
FAQ: Comment fonctionne le(s) solvant (s) éluant (s)?
FAQ: dois-je utiliser deux solvants pour mon éluant?
FAQ: Quel(s) solvant (S) choisissez-vous pour votre éluant?,
FAQ: lors de la préparation D’un TLC, pourquoi devrions-nous choisir le solvant le moins polaire pour dissoudre notre échantillon?
FAQ: Qu’est-ce qu’un « rapport dichlorométhane : Hexane de 3:1 »?
FAQ: mes taches TLC sont trop élevées, c’est-à-dire trop près du front du solvant (ou trop basses, c’est-à-dire trop près de la ligne de base). Que dois-je faire maintenant?
FAQ: Comment enregistrez-vous correctement les informations obtenues d’un ccm?
FAQ: Quel est le solvant en développement?
théorie: chromatographie sur couche mince (ccm)
pendant la chromatographie, une phase mobile (éluant) distribue les composés présents dans un mélange sur une phase stationnaire (adsorbant).,
la chromatographie sur couche mince (TLC) est un type de chromatographie, où:
– la phase mobile est un solvant ou un mélange de solvants (éluant),
– la phase stationnaire est un adsorbant solide (par exemple, de la silice ou de l’alumine) revêtu sur un support fixe tel que du verre ou du plastique (plaque TLC).
tout d’abord, la plaque TLC est préparée. Le solide inconnu est appliqué sous forme de solution en le dissolvant dans un solvant. Une certaine solution est établie dans une micropipette, puis appliquée à l’adsorbant près d’une extrémité de la plaque TLC (ligne de base) en permettant à la solution de s’évacuer sur l’adsorbant., Ce processus est généralement appelé « repérer votre plaque TLC ».
le chromatogramme est ensuite développé en plaçant la plaque TLC dans une chambre TLC (un bécher contenant la phase mobile, c’est-à-dire l’éluant). L’éluant remontera l’adsorbant par capillarité jusqu’au sommet de la plaque TLC (connue sous le nom de front de solvant), emportant l’échantillon avec lui. Ce processus est généralement appelé « exécution de votre plaque TLC ».
en Fonction de la polarité par rapport de l’échantillon et de l’éluant, l’échantillon, soit adsorbé sur la phase solide ou est élué par la phase mobile (éluant)., Si l’éluant est très polaire par rapport à votre Composé, il dissoudra votre échantillon et l’échantillon se déplacera avec la phase mobile.
dans l’ensemble, l’éluant et votre échantillon se disputeront un espace (un site actif) sur l’adsorbant (phase stationnaire) revêtu sur la plaque TLC. Le composé le plus polaire gagnera cette compétition et adhérera (adsorbera) à l’adsorbant, tandis que le reste du mélange se déplacera.
plus le composé est polaire, plus il adhère à l’adsorbant et plus la distance qu’il parcourra de la ligne de base est petite et plus sa valeur Rf est faible.,
Eluant: solvant ou mélange de solvants (phase mobile) utilisé pour développer un chromatogramme TLC (plaque).
élution: processus global de développement d’une plaque TLC.
Rf (retention or retardation factor): est une mesure de la distance parcourue par le point composé par rapport à la distance parcourue par l’éluant. Une valeur de Rf souhaitable se situe entre 0,3 et 0,7, car il est probable que d’autres composés présents dans le mélange seront visibles sur la plaque TLC lorsque le Rf se trouve dans cette plage.,
Identification d’un solide par chromatographie sur couche mince (ccm):
tout d’abord, une plaque CCM est préparée en repérant l’inconnu purifié et un échantillon authentique de chaque composé possible. Ensuite, la plaque TLC est développée. Pour l’étape suivante (Co-spotting), un échantillon authentique du composé le plus proche en valeur Rf de l’inconnu est choisi. Le co-repérage TLC d’une deuxième plaque permet une identification préliminaire de votre composé. Trois taches sont appliquées à l’adsorbant sur la ligne de base de la plaque TLC: l’inconnu purifié, un échantillon authentique et un co-spot d’échantillon inconnu et authentique., Si la plaque TLC développée ne montre qu’une seule rangée de taches, on peut conclure que l’inconnu a été purifié et que l’inconnu est peut-être le même composé que l’échantillon authentique. Cependant, comme les valeurs Rf sont relatives et non absolues, certains composés peuvent avoir des valeurs Rf très similaires. Une mesure du point de fusion mixte est nécessaire pour identifier sans ambiguïté le composé inconnu.
évaluation de la pureté d’un solide à l’aide de la chromatographie sur couche mince (TLC):
la chromatographie sur couche mince (TLC) est une technique de séparation nécessitant très peu d’échantillon., Il est principalement utilisé pour déterminer la pureté d’un composé. Un solide pur ne montrera qu’un seul endroit sur une plaque TLC développée. En outre, l’identification provisoire du composé inconnu peut être faite par l’analyse de TLC.
le Suivi de l’avancement d’une réaction:
L’avancement d’une réaction peut être contrôlée par Chromatographie sur Couche Mince. À différents moments de l’expérience, une plaque TLC est repérée trois fois, puis développée et vue sous la lumière UV:
– à la position 1 se trouve un échantillon authentique du composé de départ.
– en position 2 se trouve le mélange réactionnel.,
– à la position 3 se trouve l’échantillon authentique du produit.
la réaction est terminée, lorsque la plaque TLC montre qu’il ne reste plus de matière de départ dans le mélange réactionnel.
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Expérience Typique
le Comte N. Meyer voulait déterminer la pureté de l’acide benzoïque qui il avait obtenu de Recyclage Chimique. Il a décidé de vérifier la pureté par analyse chromatographique à l’aide d’une plaque de gel de silice TLC. Sur la plaque TLC, il a marqué la ligne de base avec un crayon, indiquant la position de repérage avec une tique., Earl a dissous environ 20 mg d’acide benzoïque dans 1 ml de méthanol. Ensuite, il a plongé une micropipette dans la solution et a légèrement touché la plaque TLC à la tique marquée sur la ligne de base.
ensuite, Earl a préparé la chambre de développement. Il a coupé un papier filtre pour tapisser un bécher de 400 ml. Il a ensuite préparé l’éluant: 10 ml d’un mélange de dichlorométhane et de méthanol dans un rapport de 10 : 1. Il a ajouté l’éluant dans le bécher, tourbillonnant sur le papier filtre complètement mouillé., Earl a placé la plaque TLC dans la chambre de développement à l’aide d’une pince à épiler et a regardé l’éluant remonter la plaque par capillarité. Lorsque l’éluant était près du haut de la plaque, il a utilisé une pince à épiler pour retirer la plaque de la chambre, en prenant soin de marquer immédiatement le devant du solvant avec un crayon.
lorsque la plaque TLC était sèche, Earl l’a vue en utilisant une lumière ultraviolette à longue longueur d’onde. Il a observé une seule tache bleue sur un fond vert clair. Son CCM a indiqué que l’échantillon testé ne contenait qu’un seul composant et que son acide benzoïque était pur., Il a utilisé un crayon pour entourer la tache et une règle pour faire les mesures nécessaires au calcul du facteur de rétention.
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conseils pratiques de laboratoire
tout d’abord, préparez une plaque TLC: dissolvez une très petite quantité de votre échantillon inconnu dans un solvant volatil, puis appliquez la solution, c’est-à-dire repérez l’adsorbant à la ligne de base.
ensuite, préparez la chambre TLC: coupez la partie du papier filtre qui s’élève au-dessus du bord du bécher.
Préparer l’éluant à l’aide d’un mélange de ces solvants. Utilisez un total de ~10 ml d’éluant dans un bécher de 250 mL.,
lors de la mesure de liquides, lisez à partir du bas du ménisque, c’est-à-dire regardez la partie la plus basse de la courbe à la surface du liquide.
agiter L’éluant pour mouiller le papier filtre et couvrir le bécher avec un couvercle. Cela va saturer la chambre avec des vapeurs d’éluant et empêcher l’évaporation de l’éluant.
développez la plaque TLC, c’est-à-dire laissez l’éluant évacuer la plaque TLC jusqu’à ce qu’elle soit à environ 1 cm du haut de la plaque. Immédiatement après avoir retiré la plaque TLC du bécher, tracez soigneusement une ligne le long de la face avant du solvant., Soyez rapide, car l’éluant s’évaporera en moins d’une minute.
Visualisez la plaque développée à l’aide d’une lampe ultraviolette ou d’une autre méthode de visualisation:
– Si le point est observé trop proche de la ligne de base, votre éluant n’est pas assez polaire.
– Si l’on observe que la tache est trop proche du front du solvant, votre éluant est trop polaire par rapport à votre composé.
Le Meilleur Rf (facteur de rétention ou de retard) se situe entre 0,3 et 0,7.
Si vous voulez que le Rf de votre spot TLC soit plus petit, c’est-à-dire, le spot à être plus bas sur la plaque, vous devez diminuer la polarité de l’éluant. Choisissez un éluant différent (solvant) ou ajustez le rapport de solvant en augmentant le pourcentage du solvant non polaire par rapport au solvant polaire dans l’éluant. L’inverse est vrai pour la Rf d’un endroit que vous voulez être plus grand, c’est à dire, l’endroit à être plus haut sur la plaque.
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Q: pour les ccm, le solvant de l’échantillon et le solvant de l’éluant doivent-ils être identiques?
Non. Parfois, le solvant de l’échantillon et le solvant de l’éluant sont les mêmes, mais cela n’est pas nécessaire., Si vous vous demandez pourquoi pensez aux différentes fonctions que chaque solvant joue dans le processus TLC.
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Q: À quoi sert un échantillon de solvant dans la préparation d’une plaque TLC?
avant de pouvoir développer votre plaque TLC, vous devez y Transférer un échantillon. La méthode la plus simple pour ce faire nécessite que vous dissolviez votre échantillon dans un solvant. Repérer la plaque TLC à l’aide d’un micropipet et attendre que le solvant s’évapore laissera l’échantillon sur la plaque TLC.
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Q: Comment puis-je déterminer mon exemple de solvant?,
en règle générale, le solvant de votre échantillon doit: 1) dissoudre votre échantillon à froid, 2) avoir un point d’ébullition bas (de sorte qu’il s’évapore rapidement) et 3) être aussi non polaire que possible (p. ex., dichlorométhane), car si un échantillon de solvant doit rester sur une plaque TLC en développement, il ne changera pas beaucoup la polarité de l’éluant(s) que vous utiliserez.
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Q: dans TLC, à quoi sert l’utilisation du ou des solvants d’éluant?
Les éluants sont la phase mobile en chromatographie, c’est-à-dire le solvant dans le réservoir de développement.,
pendant le développement du chromatogramme, l’éluant distribue l’échantillon que vous avez transféré à la plaque TLC sur l’adsorbant sur la plaque.
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Q: Comment fonctionne le ou les solvants de l’éluant?
l’échantillon composé que vous avez repéré sur la phase stationnaire sur la plaque TLC a deux choix: adsorber à la phase solide ou être élué par la phase mobile.
Si votre éluant est très polaire par rapport à votre Composé, il dissoudra votre échantillon et le transportera dans la phase mobile.,
dans l’Ensemble, l’éluant solvant(s) (aussi appelé phase mobile) seront en compétition avec votre échantillon pour un espace sur l’adsorbant (phase stationnaire) enduit sur la TLC de la plaque. Le composé le plus polaire gagnera cette compétition et adhérera (ad sorb) à l’adsorbant, tandis que le reste du mélange se déplacera avec la phase mobile .
un éluant très polaire par rapport à l’échantillon fera en sorte que la tache composée sera observée avec un Rf plus grand, c’est-à-dire plus proche du front du solvant. D’autre part, si vous éluents sont trop non polaires,la tache composée sera observée avec un Rf plus petit, I.,e., plus proche de la ligne de base.
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Q: Dois-je utiliser deux solvants pour mon éluant?
Deux solvants ne sont pas toujours nécessaires. Parfois, un solvant approprié. Cependant, deux solvants vous permettent d’ajuster facilement la polarité de l’éluant lorsqu’une plaque TLC développée ne donne pas un résultat approprié.
un éluant approprié est celui qui donne un facteur de retard (Rf, également appelé facteur de rétention) proche de 0,5 lors du développement de la plaque TLC.,
Si votre Rf est trop élevé ou trop faible, vous pouvez facilement ajuster la polarité si l’éluant a été préparé en mélangeant deux solvants miscibles en changeant les proprotions relatives dans le mélange d’éluant (par exemple, de 1:1 à 3:1).
Si un seul solvant a été utilisé, il sera nécessaire de passer à un solvant de polarité différente.
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Q: Qui solvant(s) choisissez-vous pour votre éluant?
le ou les solvants d’éluant que vous utilisez sont généralement déterminés expérimentalement.,
un éluant à deux solvants doit contenir un solvant polaire et un solvant non polaire; mais il est important que ces deux solvants soient miscibles (c’est-à-dire qu’ils se dissolvent) l’un dans l’autre. Un bon pari est de commencer avec un rapport de 1:1, puis d’ajuster le rapport en fonction des résultats obtenus à partir de chromatogrammes développés.
Si vous utilisez un éluant à un solvant, vous devriez commencer par un solvant qui n’est pas très polaire comme premier choix.
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Q: lors de la préparation D’un ccm, pourquoi devrions-nous choisir le solvant le moins polaire pour dissoudre notre échantillon?,
un solvant qui n’est pas très polaire affectera le ou les éluant(s) dans une moindre mesure si le solvant ne s’évapore pas complètement après avoir repéré le CCM.
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Q: Qu’est-ce qu’un « rapport dichlorométhane: Hexane de 3:1 »?
un rapport vous indique quelque chose sur la relation des composants donnés dans un mélange. Dans ce cas, trois unités (par exemple, 3 mL) de dichlorométhane doivent être mélangées à une unité (par exemple, 1 mL) d’Hexane pour produire un total de 4 unités (ici: 4 mL) du mélange.
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Q: mes taches TLC sont trop élevées, c’est-à-dire,, trop près du front du solvant (ou trop bas, c’est-à-dire trop près de la ligne de base). Que dois-je faire maintenant?
lorsque votre échantillon produit une valeur Rf comprise entre 0,3 et 0,7, vous n’avez pas besoin d’ajuster vos éluants.
cependant, si votre point est trop proche du front du solvant ou de la ligne de base, vous devez ajuster la polarité de votre système d’éluant.
Spot est trop proche de la ligne de base:
cela signifie que votre éluant n’est pas, par rapport à votre échantillon, assez polaire., Augmentez la polarité de votre éluant soit en augmentant le rapport du solvant le plus polaire de votre éluant, soit en passant à un solvant plus polaire.
la tache est trop proche du front du solvant:
votre éluant est, par rapport à votre échantillon, trop polaire. Vous devez diminuer la polarité de votre éluant, soit en augmentant le rapport du solvant moins polaire de votre système d’éluant, soit en passant à un solvant moins polaire.
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Q: Comment consigner correctement les renseignements obtenus d’un ccm?,
utilisez un crayon (pas un stylo) pour indiquer légèrement l’avant du solvant et pour décrire les taches que vous voyez en visualisant la plaque TLC développée avec la lampe UV ou avec la tache d’iode.
Une fois que vous avez décrit votre plaque TLC, calculez la valeur Rf pour chaque composant et esquissez une réplique de la TLC dans votre cahier de laboratoire.
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